ELISA試劑盒的實驗原理

ELISA試劑盒的實驗原理是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上的，同時結合了酶的催化作用。其基本原理包括三個方面：

1.抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學活性。

2.抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性。

3.酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗結果。

ELISA法一方面是建立在抗原與抗體免疫學反應的基礎上，因而具有特異性。而另一方面又由于酶標記抗原或抗體是酶分子與抗原或抗體分子的結合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應，產(chǎn)生放大作用，正因為此種放大作用而使本法具有很高的敏感性。因此，ELISA法是一種既敏感又特異的方法。

豬甘露糖受體(MR) ELISA 試劑盒 

樣品收集、處理及保存方法

1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。

實驗步驟

1. 準備試劑盒：將試劑盒從冰箱中取出，室溫放置30分鐘以上，使試劑盒恢復至室溫。

2. 加樣：分別向各孔中加入標準品、待測樣本和空白孔，每孔加入50μl。

3. 孵育：用封板膠紙封住反應孔，輕輕振蕩混勻，37℃孵育1小時。

4. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

5. 加酶標二抗：每孔加入50μl酶標二抗溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育30分鐘。

6. 洗滌：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液充分洗滌4-5次，每次30秒。

7. 加底物：每孔加入50μl底物溶液，輕輕振蕩混勻，37℃孵育15-20分鐘。

8. 終止反應：每孔加入50μl終止液，輕輕振蕩混勻。

9. 讀數(shù)：用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值。

實驗注意事項

1. 抗原和抗體的儲存：應嚴格按照說明書要求存放抗原和抗體，避免反復凍融和長時間暴露在高溫環(huán)境中。同時要保證試劑盒未過期，以獲得可靠的實驗結果。

2. 加樣技術：加樣時應保證加入的體積準確且不產(chǎn)生氣泡，避免加在孔壁的邊緣，以免影響與固相表面的接觸。加樣時應在每孔的旁邊放置一個加樣對照孔，以監(jiān)測加樣的準確性和重復性。

3. 溫育：溫育是ELISA實驗中的重要步驟，溫育時間和溫度的控制對于抗原抗體反應的進行和結果的影響至關重要。必須嚴格按照說明書要求進行溫育，并注意保持恒溫狀態(tài)。

4. 洗滌：洗滌是ELISA實驗中的一步，它可以去除未結合的物質(zhì)，提高檢測的特異性和靈敏度。洗滌時應保證每次洗滌時間充足，并更換洗滌液以保證洗滌效果。同時要避免在洗滌過程中產(chǎn)生氣泡，以免影響洗滌效果。

結果分析

根據(jù)試劑盒提供的標準品濃度及對應的OD值，利用標準品繪制的標準曲線，計算待測樣品的濃度。一般采用擬合曲線法或直線回歸法進行數(shù)據(jù)處理，通過計算得到待測樣品的濃度。

ELISA的優(yōu)點

1. 特異性高：由于是抗原抗體的特異性結合，因此試驗的特異性很高，能夠排除其他物質(zhì)的干擾。

2. 靈敏度高：由于酶的放大作用，使得試驗的靈敏度大大提高，能夠檢測出微量的抗原或抗體。

3. 操作簡便：ELISA試驗操作相對簡單，容易掌握，適合于大規(guī)模樣本檢測。

4. 適用范圍廣：可以用于檢測各種抗原、抗體和激素等生物分子。

免責聲明

試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或生物體實驗，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實驗者承擔， 本公司概不負責。

嚴格按照說明書操作，不同批號不可交換使用，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。

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